于斌生于黑龙江兰西。14岁时，受洗为天主教徒。1919年起，就读于吉林神罗修道院，后转至上海震旦大学预科法文组。1924年，赴罗马传信大学研读哲学、神学，先后获传信大学宗教学博士、罗马圣多玛学院哲学博士、意大利国立伯鲁日大学政治学博士学位，精通拉丁、英、德、法等语言。1928年升神父，1933年回国。中华全国公教进行会成立后，曾出任总监。1936年后，被教宗庇护十二世任命为南京教区主教。抗日战争时期，在重庆主持难民救济工作，并多次赴国外宣传中国抗战，曾应聘为国民参政会参政员。1943年，赴美国会见总统F.D.罗斯福，鲁温斯大学授予其名誉社会学博士学位。1946年，升任南京教区总主教，又两度获选为国民大会代表。1943年，在华盛顿创办中美文化协会。1952年，在纽约创办中美联谊会。1960年，辅仁大学在台湾复校，于斌任校长。1969年，被教宗保罗六世（Paul Ⅵ，1897～1978）任命为枢机主教。1978年赴梵蒂冈参加教宗保罗六世的葬礼时，因心脏病猝发去世。

于斌（右）与美国驻华大使司徒雷登合影