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重组人白细胞介素1受体拮抗剂生物学活性检定

/testing biological activity of recombinant human interleukin-1 receptor antagonist/
条目作者史新昌

史新昌

最后更新 2022-12-23
浏览 123
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利用重组人白细胞介素1受体拮抗剂可与白介素1β竞争性结合白细胞介素1受体并减弱其杀伤作用的原理,通过细胞杀伤中和实验测定该药品有效性的分析技术。

英文名称
testing biological activity of recombinant human interleukin-1 receptor antagonist
所属学科
现代医学

白介素1β能杀伤A375·S2细胞,与白细胞介素1受体结合后可阻碍白介素1β的杀伤作用。在A375·S2细胞数量和白介素1β浓度一定的情况下,该药品的蛋白浓度越高则拮抗作用越强,存活的细胞数越多,通过拟合存活细胞数与蛋白浓度的关系曲线可以计算其生物学活性。

检测过程如下:①标准品及药品稀释。将生物学活性标准品及供试品用培养液(RPMI1640培养液与等体积MEM培养基混合后添加10%胎牛血清)溶解并稀释至约1微克/毫升,取96孔细胞培养板并进行浓度梯度布局系列稀释(3倍或4倍),每孔100微克,共8个梯度。②细胞铺板。取对数生长期的A375·S2细胞,消化后计数,调节至细胞浓度至80000个/毫升,加入终浓度1纳克的白介素1b标准品混匀,每孔移100微升混悬液于制备好的96孔细胞培养板上,置于37℃和5%二氧化碳环境培养3天。③细胞检测。每孔加入CCK-8染色液10微升,继续培养45分钟,溶液呈不同深浅的黄绿色,用酶标仪参比650纳米处吸光度,检测450纳米波长处吸光度。④活性计算。以吸光度为纵坐标,稀释度为横坐标,进行四参数曲线拟合,用标准品进行校正并计算其生物学活性。

  • 王军志.生物技术药物研究开发和质量控制. 3版.北京:科学出版社,2018.

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