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碱裂解法

/alkaline lysis method/
条目作者蒋超

蒋超

最后更新 2025-01-26
浏览 219
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利用强碱进行脱氧核糖核酸(DNA)提取分离的方法。主要用于在实验室提取质粒DNA,经改良后也常用于提取动物和植物的基因组总DNA。

英文名称
alkaline lysis method
所属学科
现代医学

强碱如氢氧化钠(NaOH)和氢氧化钾(KOH)能破坏细胞膜、核膜,并使与DNA双链紧密相连的组蛋白分开和变性。当加入中和液后,DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清液中而细胞碎片和蛋白质等不变性呈絮状,离心时沉淀下来,可用于提取总DNA。当使用的强碱浓度不高时,可使细胞膜、质体膜破坏,DNA变性,而不使组蛋白和染色体DNA分离,当加入中和液后,质粒DNA分子能够复性溶解,蛋白质与染色体DNA不变性,离心时沉淀下来,可用于提取质粒DNA。碱裂解法需要的仪器较少,只需要高速离心机和移液器,实验周期短,一般为10~30分钟,操作简便,已广泛用于质粒DNA提取,也可用于动植物样本的总DNA提取。

碱裂解法是质粒DNA提取的基本方法。分离出的DNA完整性好,得率高,已广泛用于质粒DNA提取试剂盒。同时,碱裂解法对硅胶膜离心柱兼容性好,经硅胶膜离心柱可进一步提高提取的DNA质量。由于碱裂解法操作极为简便,对细胞壁的破碎效果好,不需要大型仪器,且不需要使用酚等有毒试剂,在动植物DNA快速提取和现场检测方面显示出良好的发展和应用前景。

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