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脱氧核糖核酸提取技术

/deoxyribonucleic acid extraction technology/
条目作者蒋超

蒋超

最后更新 2024-11-28
浏览 230
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从生物体内分离提取出脱氧核糖核酸(DNA)的方法。

英文名称
deoxyribonucleic acid extraction technology
所属学科
现代医学

DNA提取是进行下游分子操作的前提。所提取的DNA可用于DNA杂交、聚合酶链式反应扩增、DNA文库建立、核糖核酸(RNA)转录和分子工程操作等。

常用的DNA提取方法包括十六烷基三甲基溴化铵(cetyl trimethyl ammonium bromide; CTAB)法、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate; SDS)法、DNA碱裂解法、高盐低pH法、加热裂解法、蔗糖梯度离心法、玻璃珠法、酶裂解法、硅胶膜离心柱法、阴离子交换柱法等,以及基于这些原理的DNA提取试剂盒。最主流的DNA提取方式是CTAB法、SDS法、碱裂解法,以及基于这些方法建立的DNA提取试剂盒。DNA提取是分子操作的前提,需根据生物样本的性质和目标DNA性质(总DNA、核DNA或细胞器DNA、环装DNA或线性DNA)选择DNA提取方法。所提取DNA应符合下游分子操作的要求,即DNA含量、完整性、纯度应满足生物学操作要求。主要包括:①保证核酸一级结构的完整性;②去除核酸样品中大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染;③去除操作过程中引入的有机溶剂和过金属离子;④DNA需有足够的量。进行DNA提取一般需要使用水浴锅、高速离心机、低温冰箱和移液器等,实验周期根据方法的不同从几分钟到几天不等。提取出的DNA一般通过分光光度法或凝胶电泳法进行纯度、浓度和完整性分析。

DNA提取是分子生物学的基础操作之一,涉及DNA的分子生物学操作大多离不开DNA提取,尤其是DNA杂交和聚合酶链式反应。随着技术的发展,DNA提取趋于简化和标准化,根据方法的不同可在实验室、医院检验科、野外操作,也有不经DNA提取进行聚合酶链式反应扩增的方法。

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