生药鉴定材料不同(完整、破碎、粉末)、生药种类及药用部位不同,选择的显微鉴定方法也不同。鉴定时,首先要制备显微鉴定样品,然后依法进行观察、描述和鉴别。生药显微鉴定样品制备主要有以下六种方法。
生药显微鉴定样品制备
根据观察的对象和目的,选择具有代表性的生药,制作不同显微制片的过程。
- 英文名称
- sample prepairing for microscopic-observing
- 所属学科
- 现代医学
取供试品欲观察部位,经软化处理后,用徒手或滑走切片法,切成10~20微米的薄片。必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置于载玻片上,根据观察对象不同,滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液1~2滴,盖上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后,在酒精灯上加热透化,并滴加甘油乙醇试液或稀甘油,盖上盖玻片。
供试品粉末过四或五号筛,挑取少许置于载玻片上,滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液,盖上盖玻片。必要时,按上法加热透化。
将供试品湿润软化后,剪取欲观察部位约4毫米2,一正一反置于载玻片上,或撕取表皮,加适宜的试液或加热透化后,盖上盖玻片。
将供试品切成长约5毫米、直径约2毫米的段或厚约1毫米的片,如供试品中薄壁组织占大部分,木化组织少或分散存在,采用氢氧化钾法;若供试品质地坚硬,木化组织较多或集成较大群束,采用硝铬酸法或氯酸钾法。
氢氧化钾法。将供试品置试管中,加适量5%氢氧化钾溶液,加热至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去碱液,加水洗涤后,取少量置于载玻片上,用解剖针撕开,滴加稀甘油,盖上盖玻片。
硝铬酸法。将供试品置于试管中加适量硝铬酸试液,放置至用玻璃棒挤压能散为止,倾去酸液,加水洗涤后,照上法装片。
氯酸钾法。将供试品置于试管中,加硝酸溶液(1~2滴)及少量氯酸钾,缓缓加热,待产生的气泡渐少时,再及时加入少量氯酸钾,以维持气泡稳定地发生,至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去酸液,加水洗涤后,照上法装片。
取花粉、花药(或小的花)孢子或孢子囊群(干燥的供试品浸于冰醋酸中软化),用玻璃棒研碎,经纱布过滤至离心管中,离心。取沉淀加新配制的醋酐与硫酸(9∶1)的混合液1~3毫升,置于水浴上加热2~3分钟,离心。取沉淀,用水洗涤2次,取少量沉淀置于载玻片上,滴加水合氯醛试液,盖上盖玻片,或加50%甘油与1%苯酚各1~2滴,用品红甘油胶(取明胶1克,加水6毫升,浸泡至溶化,再加甘油7毫升,加热并轻轻搅拌至完全混匀,用纱布过滤至培养皿中,加适量碱性品红溶液〔碱性品红0.1克,加无水乙醇600毫升及樟脑油80毫升,溶解〕,混匀,凝固后即得)封藏。
坚硬的动物、矿物类药,可采用磨片法制片。选取厚度1~2毫米的供试材料,置于粗磨石(或磨砂玻璃板)上,加适量水,用食指、中指夹住或压住材料,在磨石上往返磨砺。待两面磨平,且厚度数百微米时,将材料移置于细磨石上,加水,用软木塞压在材料上,往返磨砺至透明,用水冲洗,再用乙醇处理,用甘油乙醇试液装片。