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生药显微切片

/microsection of crude drug/
条目作者张志杰

张志杰

最后更新 2024-11-30
浏览 168
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用特制刀具将生药(通常是植物药、动物药)切成薄片或超薄片,经过适当处理后,用于生药显微或亚显微观察的过程。

英文名称
microsection of crude drug
所属学科
现代医学

切片时可根据需要,将生药进行取材、软化、固定、脱水、冷冻、包埋、染色等处理,制成10~20微米厚的薄片,用于光学显微镜观察;或制成40~50纳米的超薄片,用于透射电子显微镜观察。

光学显微镜的观察,对于根、根茎、茎藤、皮、叶类等,一般制作横切片,必要时制备纵切片;果实、种类需制作横切片及纵切片;木类需观察三维切片(横切、径向纵切及切向纵切)。切片方法包括:徒手切片法、滑走切片法、石蜡切片法、冰冻切片法等。其中以徒手切片法最为简便、快速。手切的薄片为了能够清楚地观察组织构造和细胞及其内含物的形状,必要时把切片用适当的溶液进行处理和封藏。

透射电子显微镜所采用的电子束穿透力弱,样品必须制备成超薄切片;因为电子束打击样品易变形,所以要对样品进行固定、包埋处理;样品是在高真空的条件下观察的,所以样品要进行脱水处理;同时,为了增加反差,使图像更清晰,还要对样品进行重金属染色;而且,因为电子显微镜的放大倍数很高,所以样品取材也小。

透射电镜超薄切片的常规制备流程大体为:①取材。按“快、小、轻、准、冷”的原则,在尽可能短的时间内将≤1毫米3的样品放入固定液。②前固定。2%~5%戊二醛,4℃冰箱保存1小时。③清洗。磷酸缓冲液10~15分钟,3次。④后固定。1%锇酸1~2小时,4℃冰箱保存。⑤清洗。同③。⑥脱水。酒精/丙酮梯度脱水,50%、70%、80%、90%,各10~15分钟/次,100%,10~15分钟/2次。⑦浸透。包埋剂浸透3小时(可过夜)。⑧包埋。用包埋剂将样品包埋在胶囊或包埋板里。⑨聚合。置于烤箱,37℃,24小时;45℃,24小时;60℃,24小时⑩超薄切片。用超薄切片机将样品切成厚约50纳米的超薄切片。⑪电子染色。醋酸铀30~40分钟,柠檬酸铅30分钟。⑫电镜观察。

  • 康廷国.中药鉴定学. 2版.北京:中国中医药出版社,2007.

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