荧光分光光度计对经光源激发后产生荧光的物质或经化学处理后产生荧光的物质成分进行定性和定量分析。

物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态，这些处于激发态的分子是不稳定的，在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光。荧光分光光度计由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。不同物质由于分子结构的不同，其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性，进行物质的鉴定。

在溶液中，当荧光物质的浓度较低时，其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系，即IF=KC，利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析，与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。

荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190～650纳米，发射波长扫描范围是200～800纳米。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便、工作曲线范围宽等优点，可以广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。

荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光分光光度计，自动记录式荧光分光光度计，计算机控制式荧光分光光度计三个阶段。可分为单光束式荧光分光光度计和双光束式荧光分光光度计两大系列，此外还有低温激光荧光分光光度计，配有寿命和相分辨测定的荧光分光光度计等。