建于1867年夏季。位于基辅弗洛迪米斯卡大街50号^[注]，是乌克兰的第三大歌剧院，仅次于敖德萨国立歌舞剧院和利沃夫歌剧芭蕾舞剧院。

剧院最初由F.博格^[注]创建。他邀请了当时众多有才华的歌手、音乐家和剧团来此表演，剧院被正式命名为城市剧院，苏联时期最常被称为俄罗斯歌剧院。1867年10月27日开业，首演剧目是A.韦斯托夫斯基^[注]的歌剧《阿斯科尔德之墓》^[注]。剧院早期的演出大多是俄罗斯及其他国家的歌剧，包括M.I.格林卡的《鲁斯兰和柳德米拉》、A.鲁宾斯坦的《马加比家族》等；也演出了若干翻译本的欧洲歌剧，包括G.罗西尼的《塞维利亚的理发师》、W.A.莫扎特的《费加罗的婚礼》、G.多尼采蒂的《拉默莫尔的露西娅》以及G.威尔第的歌剧，这些受到基辅观众的最爱。

1896年2月4日，剧院因烛火未熄灭而发生火灾，整个建筑物被烧毁。火灾之后，剧院的剧团在其他剧场进行了数年的演出。同时市议会计划为歌剧院设计一座新建筑，采用了V.施罗特^[注]的建筑设计方案。建筑外观采用了新文艺复兴时期的风格，内部被重新设计为被称为维也纳现代主义的古典风格。该剧院当时被认为是欧洲规模最大的、最新的样板工程之一。1903年9月16日举行了开业演出。在20世纪的第一个十年，剧院吸引了最优秀的乌克兰和俄罗斯歌手，来自西方的著名歌剧明星也经常到该剧院演出。随着第一次世界大战的结束，乌克兰国家歌剧院在苏联和世界上占据了一席之地，该剧院也成为乌克兰和俄罗斯最负盛名的剧院之一。

在1984～1987年，剧院实施了大规模的重建，最终于1988年重新开业。重建后的剧院保持并丰富了原有的宏伟室内设计。舞台装置系统重新更换，乐池可以容纳100位乐手，剧院的总面积增加到60000平方米，观众厅设有1304个座席。