将药物置于干热灭菌柜、隧道灭菌器等干热灭菌设备中，利用干热空气杀灭微生物或消除热原物质。加热可以破坏蛋白质与核酸的氢键，引起蛋白质变性、核酸破坏、酶失活，从而杀灭或除去微生物。细菌芽孢比繁殖体耐热，故灭菌应以杀灭芽孢为最终标准。常用于耐高温但不宜采用湿热灭菌法的药物，以及玻璃器具、金属器械、液体石蜡等物品。同时，由于干热条件下热穿透能力较低，微生物的耐热性较强，干热灭菌需要进行较长时间的高温灭菌才能杀灭或除去微生物。

干热灭菌法须确认灭菌柜中的温度分布符合设定的标准或最冷点位置等。生物指示剂是一类特殊的活微生物制品，主要用于确认灭菌设备的性能、进行灭菌程序的验证及生产过程灭菌效果检测等，其中最常用的是枯草芽孢杆菌孢子。干热灭菌的使用条件为160～170℃灭菌120分钟以上，170～180℃灭菌60分钟以上，250℃以上灭菌45分钟以上。

干热灭菌法可分为：①火焰灭菌法。指用火焰直接灼烧灭菌的方法。火焰灼烧灭菌产品3～4次，每次20秒以上。该法灭菌迅速、简便可靠，适用于耐火焰的物品和用具，如玻璃、金属等；但不宜用于药物。②干热空气灭菌法。指用高温干热空气进行灭菌的方法。由于在干燥条件下热穿透能力差，温度均匀性差，且微生物的耐热性较强，故干热空气灭菌法采用的温度一般比湿热灭菌法高。适用于耐热耐高温的制品或化学药品，以及不允许湿气穿透的油脂类，如注射用油；但不宜用于橡胶、塑料及大多数药品。

干热灭菌法灭菌需要注意以下问题：①如果需要灭菌的物品装得过紧或过满，可能导致灭菌不能均匀升温。②有水的灭菌玻璃容器进行干热灭菌容易引起炸裂。③灭菌温度保持在160～170℃，可防止灭菌时棉花、报纸等烧焦或燃烧。④应避免灭菌物品直接放在电烘箱地板上。⑤操作人员应待温度降至60℃以下再打开灭菌箱门取出灭菌物品，以避免灭菌的玻璃器皿因温度过高的灭菌箱骤然降温而发生炸裂。

干热灭菌须通过细菌内毒素灭活验证试验来证明除热原的有效性，常用的细菌内毒素是大肠埃希菌内毒素。灭菌过程中室内空气应循环并保持正压，以确保无菌性。进入腔室的空气应通过经完整性测试的高效过滤器进行过滤。同时，应对灭菌过程中的温度、时间、室内外压差进行记录。