在蛋白质溶液中加入考马斯亮蓝，考马斯亮蓝通过范德瓦耳斯力、疏水作用及静电力与蛋白质物理性结合，形成蛋白质-色素结合物，溶液颜色由红色变成蓝色，并在595纳米处有最大吸光度；在一定蛋白质溶度范围内，其吸光值与蛋白质含量成正比，可通过比色法定量测定蛋白质。考马斯亮蓝分G250和R250两种，G250与蛋白质结合迅速，常用于蛋白质含量的测定；R250与蛋白质结合缓慢，但可以被洗脱，常用于电泳实验中对条带染色。考马斯亮蓝法灵敏度高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。考马斯亮蓝法操作简单，方法简便，所用试剂较少，干扰物质少，缓冲液、还原剂以及络合物等均不会影响其显色，显色剂易于配置，与蛋白质结合反应迅速且结合物颜色十分稳定，但必须在1小时内完成测定。考马斯亮蓝法在测定不同的蛋白质浓度时会有较大的偏差，这是由于不同蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸含量不同。