色谱定量分析的依据是在一定操作条件下,被测组分的质量或其在流动相中的浓度与检测器的响应信号(峰面积或峰高)成正比。但是同一种物质在不同类型检测器上往往有不同的响应灵敏度;同样,不同物质在同一检测器上的响应灵敏度也往往不同,即相同量的不同物质产生不同的峰面积或峰高。这样,各组分峰面积或峰高的相对百分数并不等于样品中各组分的质量分数。为使峰面积能够准确地反映待测组分的含量,就必须引入定量校正因子以校正峰面积或峰高。
高效液相色谱定量测定中,物质的检测量与色谱响应值(峰面积等)
之间的比值称为绝对校正因子
,即单位响应值(峰面积等)所对应的被测物质的量(浓度或质量),其大小主要由仪器的灵敏度所决定,由于灵敏度和检测器及其操作条件有关,因此,该校正因子不具有通用性。而某物质
与所选定的参照物质
的绝对校正因子之比,为相对校正因子
,即通常所讲的校正因子:
若某组分质量为,峰面积
,则
与
之积代表了质量为
的标准物质的对应峰面积。也就是说,通过相对校正因子,可以把各个组分的峰面积分别换算成与其质量相等的标准物质的峰面积,于是统一了比较标准。上面介绍的相对校正因子中组分和标准物质都是以质量表示的,故又称为相对质量校正因子;若以摩尔为单位,所得的校正因子称为相对摩尔校正因子,用
表示。
相对校正因子的测定方法:相对校正因子值只与被测物和标准物以及检测器的类型有关,而与操作条件无关。因此,值可自文献中查出引用。若文献中查不到所需的
值,也可以自行测定。常用的标准物质,对热导检测器(TCD)是苯,对氢焰检测器(FID)是正庚烷。测定相对校正因子时以采用色谱纯试剂为最佳选择。若无纯品,也要确知该物质的质量分数。测定时首先准确称量标准物质和待测物,然后将它们混合均匀后进样,分别测出其峰面积,再进行计算。