循环酶放大方法工作原理为物质A在酶a（Ea）和底物a（Sa）的存在下转化为物质B，同时生成产物a（Pa）。物质B又在酶b（Eb）和底物b（Sb）的存在下转化为物质A，同时生成产物b（Pb）（见图）。上述反应每循环一次，将消耗与物质A等量的Sa和Sb，同时生成等量的Pa和Pb。因此在一定时间内，循环反应的次数就是Sa和Sb消耗或者Pa和Pb生成相当于物质A（或物质B）的倍数。通过检测Sa或Sb的减少量或者Pa或Pb的生成量，就可以提高检测物A（或物质B）的n倍的灵敏度。

循环酶放大方法原理图

按反应中使用的酶可将循环酶放大方法分为4种类型：①底物循环。即氧化酶和脱氢酶系统。氧化酶对靶物质氧化，脱氢酶又把氧化态的靶物质转化成还原态方法。②底物循环。即脱氢酶和辅酶系统。靶物质和它的氧化产物作为底物被循环，仅用一种酶和两种辅酶（巯基NAD和NADH）。③辅酶循环。即双脱氢酶系统。靶物质被转化为辅酶（NAD），使用两种脱氢酶使NAD-NADH间循环。④氨循环。即NAD合成酶-脱氢酶系统。靶物质NH₃被转化成NAD，再通过亮氨酸脱氢酶使L-亮氨酸转变成氧化异己酸和，又重复反应。

传统的酶反应只能按靶物质的量生成相应的产物量，而酶循环法则可在一定的反应时间内通过靶物质的重复反应来增加产物的量。另外通过使用酶的特殊底物（如巯基NAD）可简化反应体系，亦可偶联显色反应（如四氮唑染料或Trinder反应）使其成为可见光谱测定。本法还可与荧光和发光分析结合使灵敏度更高。

酶循环法具有诸多优越性，是一种非常有前途的测定方法，为临床化学分析开辟了新天地。但尚有一些问题需要解决，如酶的用量大、成本高、某些微量物质的测定尚缺乏工具酶等。因此，酶循环放大方法的推广应用还有待工具酶和有关原材料的大幅度降价以及新工具酶的开发。