用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板。对薄层板的要求是有一定的机械强度及化学惰性,且厚度均匀、表面平整,因此玻璃板是最常用的(见图)。其大小可根据样品量、组分种类和数目、展开方式来确定。除另有规定外,用5厘米×20厘米,10厘米×20厘米或20厘米×20厘米的规格,要求光滑、平整,使用前必须洗净,洗净后不附水珠,晾干备用。检测用小板或狭长板,如7.5厘米×2.5厘米、20厘米×2.5厘米;定性分析可选用6厘米×18厘米的板,也可以用2.5厘米×7.5厘米的显微镜载片;定量分析选用稍大的板,如16厘米×18厘米、10厘米×20厘米或20厘米×20厘米的板;制备性分离常用较大规格的薄板,如40厘米×20厘米。
薄层板
底板在使用之前用洗涤剂浸泡,再用自来水、蒸馏水洗净,不能有任何油斑或污迹,否则将影响制板质量和层析效果。①对固定相的要求。除了颗粒较细,粒度范围较窄外,还要根据被分离化合物的性质来选择合适的固定相。分离亲脂性化合物常选择氧化铝、硅胶、乙酰化纤维素及聚酰胺,分离亲水性化合物常选择纤维素、离子交换纤维素、硅藻土及聚酰胺等。但也有例外,如脂溶性叶绿素在氧化铝及纤维素上都能分离。②层板制备。常用的涂铺方式有:倾注法、喷洒法、浸渍法、刮平法和涂布器法等。常用的薄层板有手工制薄层板、预制板、烧结薄层板等。
将1份固定相和3份水在研钵中向同一方向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入涂布器中,在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2~0.3毫米),取下涂好薄层的玻璃板,置水平台上于室温下晾干,后在110℃烘30分钟,即置于有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。手工制板一般分不含黏合剂的软板和含黏合剂的硬板两种。
吸附剂颗粒太大,洗脱剂流速快,分离效果不好;颗粒太小,溶液流速又太慢。一般说来,吸附性强的颗粒稍大,吸附性弱的颗粒稍小。氧化铝粒度一般在100~150目。氧化铝分为碱性氧化铝、中性氧化铝和酸性氧化铝。碱性氧化铝适用于碳氢化合物、生物碱及碱性化合物的分离,一般适用于pH为9~10的弱碱性环境。中性氧化铝适用于醛、酮、醌、酯等pH约为7.5的中性物质的分离。酸性氧化铝适用于pH为4~4.5的酸性有机酸类的分离。氧化铝、硅胶根据活性分为5个级别,一级活性最高,五级活性最低。
为了使固定相(吸附剂)牢固地附着在载板上以增加薄层的机械强度,有利于操作,有时在吸附剂中加入合适的黏合剂;有时为了特殊的分离或检出需要,在固定相中加入某些添加剂。
硅胶板于105~110℃烘30分钟,氧化铝板于150~160℃烘4小时,可得活化的薄层板。