1941年，美国病理学家、免疫学家A.H.孔斯^[注]首先创建了免疫荧光技术，孔斯等发现一些荧光物质可以与抗原及抗体等蛋白质结合，结合物既保留蛋白质原有活性，又具有发射荧光的特点。1955年，孔斯、E.H.勒迪克^[注]和J.M.康诺利^[注]等进一步发展和完善了荧光抗体免疫组织化学染色技术。

免疫荧光法首先是将已知抗体/抗原用荧光素标记，制成荧光抗体/抗原，将荧光抗体/抗原作为探针与细胞或组织中的待测抗原/抗体反应，形成含有荧光素标记的抗原抗体复合物，荧光素在激发光的照射下吸收能量，而后能量则以光子（荧光）的形式被释放，通过荧光显微镜或荧光分光光度计计数荧光强度，从而对待测抗原/抗体进行定位、定性或定量。常用的荧光素包括：藻红蛋白（P-phycoerythrin，PE）、异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）以及别藻蓝蛋白（allophycocyanin，APC）等。根据采用的抗原抗体反应形式，荧光抗体免疫组织化学染色技术可以分为直接法、间接法以及补体法等（图1）。免疫荧光法具有特异性强、灵敏度高及反应快速等优点，常用于测定多肽、蛋白质以及核酸等生物活性物质的表达分布（图2），广泛应用于免疫学、病理学、肿瘤学以及药物监测等方面。

图1 荧光抗体免疫组织化学染色技术分类

图2 荧光抗体免疫组织化学染色技术检测细胞表面抗原