该方法是由C.C.切尔金斯基^[注]等在1983年创建，应用该方法检测了脾细胞中分泌特异性抗体的细胞数量，发现其具有较高的敏感性及特异性。

ELISPOT的原理是首先将特异性单克隆抗体固化在滤膜或聚乙烯板上，再添加细胞培养，当细胞受到刺激后可在局部产生大量的细胞因子，此细胞因子可被固相化的特异性单克隆抗体捕获，培养一定时间后洗脱细胞，被捕获的细胞因子滞留在固相支持物表面，然后再添加生物素标记的抗细胞因子抗体与之结合，最后加入碱性磷酸酶标记的亲和素以及底物显色液显色（图1）。5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸/四唑硝基蓝（BCIP/NBT）在碱性磷酸酶作用下，可在聚偏二氟乙烯（PVDF）膜的孔板中形成“紫色”的斑点（图2），该斑点代表产生细胞因子的细胞，通过酶联斑点分析系统可对斑点进行定量分析。ELISPOT不仅能检测分泌细胞因子的细胞，也可以检测分泌抗体细胞，还是公认的最灵敏的抗原特异性T细胞体外检测方法，可用于T细胞分型研究、疫苗免疫效果评价以及临床疾病辅助诊断等。ELISPOT也有一定的缺点，如其只能在体外检测细胞分泌能力，不能观察细胞形态，也不能直接评估细胞在体内的行为等。

图1 ELISPOT技术原理

图2 PVDF膜孔板中形成的斑点