早期研究中通常采用比色法，即让酶与底物在一定温度下作用，然后取少量样品, 终止酶促反应，加入试剂进行化学反应显色，测出底物和产物的变化。由于比色法灵敏度较低，且手工操作不易控制，测定时间常定在30分钟左右，因此被大多数文献称为“固定时间法”。此命名指出了用这类方法测酶活力浓度，必须保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要很精确，否则将引起较大误差。这种方法的优点是比较简单，因测定时酶促反应已被终止，故比色计或分光光度计无须保温设备，显色剂的选择也可不考虑对酶活力的影响。缺点是无法判断整个酶促反应进程中是否都是零级反应。

在一定的酶促反应体系中，当反应进行一定阶段，取出一定量反应液进行检测，若反应进程达到要求，向反应体系中加入酶变性剂或用加热方法使酶灭活，终止反应进程。取样法以其测定方法简单、质控容易等优点，广泛应用于大反应体系，尤其在转化生产行业具有较高的应用价值。

有一种测淀粉酶的方法，即酶与底物混合后，每隔半分钟取一滴出来加入碘液呈色，观察颜色由紫色变为红色的时间，也就是淀粉酶全部水解变为糊精的时间，并由此时间的长短计算出酶含量高低，这类方法无须使用很高浓度的底物，有其独特之处，在自动生化分析仪中也曾使用类似的方法，值得人们重视。