常用的发情鉴定方法有外部观察法、试情法、阴道检查法、直肠检查法、激素测定法等。用B型超声扫描直接观察卵泡发育，是发情鉴定的常规方法。

根据家畜的外部表现和精神状态，判断是否发情及发情的状况。是各种动物发情鉴定中最常用，也是最基本的方法。猪、牛、马、驴、山羊等畜种都有明显的外部发情症状，均可使用观察法。马和驴的发情期较长，单一的观察法难以判定配种适期，还需结合采用直肠检查法。绵羊的发情症状不是很明显，尤其在群牧情况下，几乎无法使用观察法。牛的发情鉴定中可用辅助观察的方法，即用不干性颜料在母牛尻部做上标记，一旦母牛接受爬跨，标记即被涂抹，这一方法可免去终日特别是夜间观察的不便。

根据母畜对公畜的反应判断其是否发情及发情的程度。试情公畜通常选用健壮、性欲旺盛、无恶癖的同种公畜，但必须预先做过输精管结扎术或阴茎移位术。该法适用于各种家畜，更是绵羊不可取代的发情鉴定方法。对于羊、猪可使用试情兜布。发情的母畜愿意接近公畜并呈交配姿势；不发情的或者发情结束的母畜则远离公畜，强行接近时有反抗行为。试情应定期进行，以便掌握母畜的性欲变化情况。

根据母畜阴道黏膜的颜色、充血程度和润滑程度，子宫颈的颜色、肿胀度、开口的大小及黏液的量、色质与黏稠度等，来判断母畜发情与否及发情的程度。母畜发情前期，黏液量开始增多，由灰白色逐渐变为无色透明。发情期，黏液量明显增多。牛的黏液量很大，富有牵缕性，可自阴门悬垂至地面；发情马、驴黏液的黏着性强，可拉成长细丝；猪的黏液量较少，但常能见到其阴门处黏附尘土或褥草。发情后期，黏液量逐渐减少，呈灰白色糨糊状。阴道检查时，一般借助消毒过的阴道开张器进行视诊。由于该法不能准确判定排卵时间，检查时处理不当容易引起生殖系统感染，所以生产中不多用。

术者手戴长臂手套进入直肠，隔着肠壁触摸母畜卵巢的大小、形状、质地以及卵泡的发育情况，从而判定发情与否的方法。该法适用于牛、马、驴等大家畜，可准确区分发情阶段，预测排卵时间，判定配种时机。马发情初期，卵巢上有直径约1.5～2厘米的卵泡，呈硬弹性，无波动；接着增长至2.5～3厘米，呈软弹性，壁厚，略有波动。卵泡成熟期时，卵泡增至5～7厘米，壁薄，有明显波动和弹性。至排卵期，卵泡壁菲薄，柔软，波动性极大。排卵6小时内，排卵后的卵泡壁呈现凹陷，继而形成血体，再到新黄体，直径约2～3厘米，如柔软肉团，无波动。卵泡成熟期和排卵期是最佳配种或输精时期，排卵6小时内追配仍可取得理想效果。牛发情时，卵巢上卵泡发育至直径1厘米左右，呈柔软弹性、有明显波动时，为卵泡成熟期，是配种或输精的最佳时机。排卵6小时内，卵巢上亦有明显凹陷，卵巢质地柔软，接着凹陷被血体填平并渐向卵巢表面突出，形成一新黄体。

通过重压家畜背部或骑跨来测试其反应，以此确定是否发情的方法。仅用于猪。约一半的发情母猪允许测试人员重压其背或骑跨，对压背试验表现站立反射；另一部分发情母猪抗拒此种测试或者只表现阴性反应。如果在进行压背试验时，播放公猪求偶叫声的录音，并喷洒含有公猪性外激素的溶液或包皮腺分泌物，绝大多数（约90%）发情母猪对压背试验呈阳性反应。

通过测定母畜体内激素的变化，以确定其是否妊娠的方法。母畜发情时，孕激素水平降低，雌激素水平升高，应用放射免疫测定技术或酶联免疫测定技术检测血液孕酮或雌二醇含量，便可进行发情鉴定。已有多种发情鉴定用或妊娠诊断用的免疫测定试剂盒供应。这种方法的应用需要一定的仪器设备，同时还需要一定的间隔时间，所以生产中应用不多。

利用超声诊断仪探查母畜卵巢及子宫的变化，以确定是否发情的方法。配有一定功率探头的超声波仪，其探头通过母畜阴道壁或直肠壁而接近卵巢上的黄体或卵泡时，由于探头接受不同的反射波，显示屏上将显示出不同的黄体或卵泡图像。根据卵泡直径的大小，可确定发情阶段。这种鉴定方法准确、可靠，但操作复杂、成本高，主要应用于小动物。